作者：徐奕胜 刘鹏
单位：赣南医学院第二附属医院
近日，科室遇到一件比较离奇的梅毒事件，苦寻至今也未找到原因，故分享案例供大家讨论。
案例经过
患者，男，18岁，捐献血浆前，被查出梅毒结果稍高，如图1。
图1
从图1可看出，梅毒检测方法：ELISA法，W厂家，从左到右孔位顺序分别为：三个阴性对照、两个阳性对照、一个质控，此患者两个血清样本测试。酶标仪测得患者两个结果分别为：1.256和1.751，均大于1，为阳性结果。
于是，血浆站使用K厂家试剂进行复检，结果为阴性，如图2。
图2
从图2信息：ELISA法，K厂家，从左到右孔位顺序：Disable（无效，未放置孔，类似空位测试）、三个阴性对照、一个阳性对照、一个质控，此患者两个血清样本测试。酶标仪测试患者结果：0.346和0.365，均小于1，为阴性结果。
如此，一阴一阳结果，血浆站建议患者来医院复查，故来我院门诊检查。门诊医生开出梅毒定量，结果如图3。
图3
我院梅毒定量方法学为：化学发光法。患者结果远大于科室参考值，当天输血前三项定量（艾滋、梅毒、丙肝）高低值质控在控。考虑患者年龄较小，却感染梅毒？询问患者，否认冶游史。同事建议临床加做梅毒RPR及梅毒滴度，结果均为阴性，如图4。
图4
同事百思不得其解，也一时也想不到什么原因导致。将梅毒RPR及梅毒滴度阴性报告给患者，本院梅毒定量结果隔日复查，并建议其去人民医院复查梅毒定量。
隔日，我院梅毒定量结果依旧阳性，此时患者发回来的人民医院报告：阴性的！如图5
图5
从图5中可以看出，人民医院开出HIV（荧光）、梅毒螺旋体抗体（荧光）、梅毒血清学试验（定性）、梅毒血清学试验（定量），均为阴性！得知人民医院的梅毒（荧光）方法学为：时间分辨法。
此时，真的是犹如晴天霹雳，莫非我院化学发光法错了，或者被干扰了？于是，将患者送检做梅毒螺旋体特异性抗体TPPA试验，回报结果：阴性！如图6
图6
同时，科里也进行了梅毒ELISA法检测，X厂家试剂，结果为阴性。科里每间隔一周左右给患者抽血复查，共两次，患者也愿意配合，梅毒定量结果依旧还是阳性。两次结果如图7
图7
我们开始怀疑化学发光厂家试剂、仪器是否存在缺陷，仪器与试剂配套，为同一厂家。查找梅毒定量（化学发光法）试剂说明书，其检验原理步骤为：
1、样本和生物素标记的梅毒螺旋体抗原（P15、P17、P47）加入固相链霉亲和素白色不透明的微孔中，若样本中含有梅毒螺旋体抗体，则形成 固相链霉亲和素--生物素梅毒螺旋体抗原--梅毒螺旋体抗体复合物。
2、洗掉游离成分。
3、加入另一株梅毒螺旋体抗原--辣根过氧化物酶（HRP）结合物，与固相的梅毒螺旋体抗体结合。
4、洗掉游离成分，加入发光液。
5、在氧化剂作用下，辣根过氧化物酶催化鲁米诺生成处于激发态的氨基邻苯二甲酸离子，其恢复到基态时，释放出425nm的光子，于第5分钟测定各加样本孔的发光值（RLU）。样本的发光值与其中的梅毒螺旋体抗体浓度呈正相关。
由于反应模式是夹心法：固相链霉亲和素--生物素梅毒螺旋体抗原--梅毒螺旋体抗体--另一株梅毒螺旋体抗原--辣根过氧化物酶，我们开始怀疑患者血清中是否存在一种未知的抗体或干扰物质，并能与生物素相结合的物质，导致结果假阳性？
将患者血清进行生化测试，挑选总蛋白TP、ALB、ASO、RF、IgG、IgM、IgA项目，结果只有ALB微高、ASO 356 IU/mL↑（参考值0~200 IU/mL），如图8
图8
莫非是抗链球菌溶血素“O”（ASO）导致的梅毒定量阳性？为了验证，我们挑选出体检科一个抗O结果为 324 IU/mL↑标本进行梅毒定量测试，结果竟然是阴性！如图9
图9
而且，我们也向周围医院借到抗链球菌溶血素“O”（乳胶凝集法）试剂的阳性对照液，上机测试，梅毒定量阴性。
至此，可以判断：抗O并不影响梅毒定量（化学发光法）结果。之前的推论又被否定，那到底是什么在干扰结果呢？最终联系试剂厂家，将患者标本邮寄厂家研发部进行确认。
几天后，厂家给出的回复：使用梅毒免疫印迹法测试，P45位置出现条带，不确定是否由P45因素引起的假阳性，可以按照阴性出报告。
也就是说，厂家也无法确定此患者梅毒阳性的原因。最后，我们还是以梅毒定量阴性结果发出，但至今仍不明白为何仪器定量结果为阳性。
案例分析
回顾整个事情，为方便对比各方法学及结果，绘制表1如下：
表1
虽然患者的结果大家都比较一致赞同是阴性，可通过这件事，我们也看到B厂家的试剂或许仍有待改进之处，但也不排除患者体内存在的某种物质与B厂家试剂结合导致阳性。
自己也向血浆站征得两个试剂说明书，但均未提及试剂中包含的成分，故无法从中分析。
在追踪患者生活史时，建议其女友检测梅毒，结果为阴性。患者自诉未服用任何药物、也未输液，既往体健。
我们排除了血清球蛋白、ASO、RF、免疫球蛋白等因素干扰，此案例分析至今，也仍未找到一个合理的解释，可谓是一个非常奇怪的梅毒结果。
另外，根据免疫印迹法P45条带阳性，推断患者体内存在抗P45抗原的抗体，而B厂家试剂生物素--抗原恰巧又有P15、P17、P47抗原，抗P45抗原抗体是否能与这三个抗原存在交叉反应，导致结果的阳性？翻阅检验操作规程第4版、本科教材，均无详细介绍梅毒印迹法。
分享此奇怪的梅毒结果案例供大家探讨是否也遇到过此怪异现象，是否有解决方案。
总结
这一次奇怪的梅毒结果，也间接的告诉我们：①方法学的局限性②实验室需具备额外的确证方法学，如本室就需要具备TPPA试剂。
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