rpr实验步骤

rpr实验步骤 1、取出RPR试剂,平衡到室温; 2、分别吸取50微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在 纸卡的两个圆圈中; 3、另吸取50微升待检血清均匀铺加在纸卡的另一个圆圈 4、用盒中专用针头,滴管吸取RPR试剂,分别垂直滴加 5、用RPR旋转仪水平转动纸卡8 分钟,100 转/分钟,然 6、定性试验呈弱阳性或阳性者,必须做定量试验才能了解患者血清中的抗体滴 度,具体方法如下:将待检血清用生理盐水作倍比稀释(原血清、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32),然后对每个稀 释度的血清按定性试验方法再进行测定并判断结果 3、阳性反应(+++~++++):可见中等或较大的黑色凝块,溶液清亮。 检测者:复核者: 采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。 供在白色卡片上进行试验,以检测血清或血浆中反应素用。 可作为梅毒病人的诊断和疗效之参考。 所用抗原为标准的牛心肌脂抗原,该方法操作简便、迅速,适用于大量标本检测,目前许多血站用RPR 试验对献血者进 行梅毒普查。RPR 试验和 df 方法对一期梅毒的诊断相互配 合,可早期诊断梅毒。缺点是当抗体含量过高时,易出现假 阴性反应,即前带现象(prozone phenomenon),会有漏检; 还易出现生物学假阳性反应。

对潜伏期梅毒、神经梅毒不敏 RPR是“快速血浆反应素试验”的英文缩写,是一种非螺旋 体抗原血清试验。RPR 的原理是将标准的类脂质抗原结合在 标准的活性炭粒上,这种含抗原炭粒与病人血清混合在一起 后,形成肉眼可见的凝染颗粒。颗粒大小与反应素的量成正 比,而且通过稀释血清的再试验可以判定反应素的浓度。本 试验是在纸上进行的,10 分钟即可用肉眼读出结果。此项检 查的优点是:操作简便,判断结果容易,快速诊断。适用于 基层推广及大规模人群的筛查试验。动态观察可用于梅毒疗 效评价及疗后随访。 缺点是:特异性差。敏感性方面,出现较晚,且晚期梅毒中可部分转阴,因此不适于早期梅毒诊断,对潜伏梅毒及神 经梅毒也不敏感。 三、VDRL试验 心肌中提取的心磷脂,适量加入胆固醇及卵磷脂以提高敏感性,通常称这种抗原为心拟脂抗原。VDRL 试验属于微量 玻片法,是唯一推荐用于检测脑脊液反应素的试验,对诊断 神经梅毒具有重要价值,可作定量及定性试验,操作简单, 试剂及对照血清已标准化,费用低。但对一期梅毒敏感性不 2.检测特异性抗体----使用密螺旋体抗原的血清学试验:FTA-ABS、TPHA、TPPA 、ELISA 、WB 梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性、系统性疾病,近年来在我国增长迅速,已成为报告病例最多的性病。

临床上实验室 报告可疑梅毒常有筛查和确诊等两个甚至多个试验结果,面 对不同试验的不同结果,你是否会正确解读呢? 近期来自杜克大学的Meredith Clement博士和加利福 尼亚大学的 Charles Hicks博士在 JAMA 的“诊断试验解 读”栏目发表文章,从一个病例出发,详细阐述了如何解读梅 毒血清学试验结果,现将主要内容编译如下: 男性,45岁,近期因排尿困难就诊于急诊,诊断为淋菌 性尿道炎,予肌内注射头孢曲松及口服阿奇霉素治疗后排尿 困难缓解,自觉状态好,此次因随访就诊。 患者于10 年前离异,此后有多位性伴侣,均为异性。包 括生殖器及皮肤在内的体格检查未见明显异常,神经系统查 体未见明显异常。其他性传播疾病筛查示:既往免疫后的乙 肝血清学表现,HIV 阴性(酶免疫分析法),梅毒检测阳性 患者否认既往曾诊断或治疗梅毒,当地卫生机构也没有该患者梅毒检测的记录。 表1:患者检查结果 TP-EIA检测值 1:8 阳性 参考范围 阴性 阴性 缩略词:RPR,快速血浆反应素试验;TP-EIA,梅毒螺旋体酶免疫分析 患者患有潜伏梅毒,应予240 万单位苄星青霉素 每周肌内注射,共三次(720万单位青霉素); 患者RPR 呈低滴度,代表血清固定状态,不需要治疗; 患者RPR 滴度升高考虑为假阳性,应重复检测; 答案:A.患者患有潜伏梅毒,应予 240 万单位苄星青霉 每周肌内注射,共三次(720万单位青霉素)。

美国的梅毒发病率正在逐年攀升,预计目前每年约有5.5 万新发病例,因此正确的认识梅毒检测具有具有重要的公共 健康意义。 梅毒螺旋体是引起梅毒的病原体,体外无法培养,因此诊断需要间接的技术,例如依靠检测梅毒螺旋体抗体和非特异 性梅毒螺旋体抗体的血清学检查。 梅毒螺旋体试验检测针对梅毒螺旋体的特异性抗原组分的抗体,而宿主在对梅毒感染做出应答时会产生的非特异性 心磷脂 卵磷脂的梅毒反应素,非特异性梅毒螺旋体试验即是检测针对梅毒反应素抗原的抗体。 快速血浆反应素(RPR)试验,是一个非特异性梅毒螺旋体试验,因其使用广泛,相对容易操作,价格低廉,传统上 用于筛查梅毒。此外,RPR 是一个定量试验,抗体滴度可用 于评估对治疗的应答。 而,RPR需要肉眼判断絮结产物(颗粒聚集),这个 过程需要实验室技术人员花费时间,不适于自动化分析。更 重要的是,在自身免疫病、妊娠、结核或其他炎症情况 RPR可出现假阳性结果。因此,RPR 需要特异性梅毒螺旋 体血清学检测,例如梅毒螺旋体酶免疫分析(TP-EIA)确认 其结果。 尽管TP-EIA 也会出现假阳性结果,同一位患者两项试验 均出现假阳性不太可能。因此,当非特异性梅毒螺旋体试验 和特异性梅毒螺旋体试验均为阳性时,可诊断梅毒(表 不同阶段的敏感性,%早期 一期梅毒 二期梅潜伏梅 100非特异性梅毒螺旋体试验 RPR,%(范围) 86 (77-100) 100 特异性梅毒螺旋体试验 IgM-EIA IgG-ELISA 93 100 85 100 64 100 NA NA 98(95-100) 73 缩略词:EIA,酶免疫分析;ELISA,酶联免疫吸附试验;NA,无可用数据;RPR,快速血浆反应素。

因为患者无临床症状表现,但梅毒血清学检测阳性,因此他患有潜伏梅毒。潜伏梅毒可分为早期潜伏梅毒,即感染后 年以上才诊断。当最初感染时间不确定时,可考虑为晚期潜伏梅毒。 肌内注射即可,而晚期潜伏梅毒需 剂(每周一次)的治疗。治疗成功后,RPR会随时间下降,可能会转为阴性,也可能会保持在一个低滴 度水平(普遍 1:32)及合并 HIV 感染、CD4 细胞计数 低的患者。 传统上常用非特异性梅毒螺旋体试验,例如RPR 进行筛 查,以特异性梅毒螺旋体试验进行确诊(例如 TP-EIA)。近 来,很多实验室将此顺序进行调换,利用自动化的 TP-EIA 进行筛查,而需要更多人工操作的非特异性梅毒螺旋体试验 (例如 RPR)用于确诊。 这种顺序的调整可能会带来诊断的困惑,尤其筛查特异性梅毒螺旋体抗体阳性,而非特异性梅毒螺旋体试验却为阴性 结果时。 对于既往未接受过梅毒治疗的饿患者,可选择替代的特异性梅毒螺旋体试验,例如梅毒螺旋体颗粒聚集试验(TPPA) TP-EIA的阳性结果进行确认。 就本例患者而言,因非特异性和特异性梅毒检测均为阳性,足以得到梅毒的诊断。 患者预后 在任一阶段诊断的梅毒都应视为传染病,因此,患者(转载于: 网:rpr实验步骤)的阳性结果已 向其所在州和县卫生部门上报。

随访复查,患者 RPR 一般而言,成功治疗后预期RPR 滴度会下降,因此美国 疾控中心建议晚期潜伏梅毒治疗后 6、12、24 个月复查 RPR。治疗后 RPR 下降的期望值尚不完全清楚,尤其是对 于治疗前 RPR 相对较低的潜伏梅毒(例如本例)。 若证实RPR 滴度升高 倍以上,则提示再次感染或治疗失败,需要重复 HIV 检测、脑脊液检查排查神经梅毒, 以及依据诊断进行额外治疗。 1、梅毒螺旋体不能进行体外培养,因此需要借助血清学检测诊断梅毒; 2、非特异性和特异性梅毒螺旋体试验联合用于诊断梅毒,而非特异性梅毒螺旋体试验用于监测疗效; 3、在诊断时对梅毒的阶段进行恰当分类并启动治疗,为治疗后定义合适的血清学应答提供基线参考。 梅毒螺旋体三种血清学实验方法的比较摘要 目的:比较 三种血清梅毒抗体检测方法的性能及检测价值。因明胶颗粒 凝集试验(TPPA)是公认的最佳梅毒确认方法,所以我们以 TPPA 方法作为参照,进行比较。方法:采用酶联免疫吸附 试验(ELISA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)作同 步检测,用明胶颗粒凝集试验(TPPA)作参照对比。结果: 45 例标本,以 TPPA 作为参照,ELISA 法假阳性仅 TRUST法假阳性有 例。

结论:ELISA法检测血清中梅毒抗体灵敏度和特异性均明显高于TRUST, TPPA法无显著差异,但两种方法各有其优点,在方法学 上呈互补性,将两种方法结合更有利于提高检测的敏感性和 特异性。 关键词梅毒抗体;甲苯胺红不加热血清试验(TRUST); 酶联免疫吸附试验(ELISA);明胶颗粒凝集试验(TPPA)。 1.1标本来源:我院 2009—2010 年门诊疑为梅毒的患 者标本 45 例,年龄在24—68 岁之间,平均46 岁,其中女 性12 例,男性33 1.2试剂:TRUST 试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司 提供;ELISA 试剂盒为北京万泰生物药业股份有限公司产 品;TPPA 试剂盒为日本富士株式会社产品。 1.3实验方法:采用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST) 联免疫吸附试验(ELISA)同步进行检测,以明胶颗粒凝集试验(TPPA)作参照。 甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)是由心磷脂+胆固醇+卵磷脂组成的复合抗原,吸附于甲苯胺红上,检测血清中 非特异性抗体。使用试剂,用旋转仪振摇,室温保持20—24, 每分钟转摇100 分钟观察结果。TRUST试验是一种非 特异性血清试验。

酶联免疫吸附试验(ELISA)为双抗原夹心法,使用试剂,比色用全自动酶标仪比色。ELISA 法检测梅毒螺旋体是将基 因重组表达的梅毒膜特异性抗原包被在微孔板上,用双抗原 夹心法测定梅毒特异性抗体,主要检测梅毒螺旋体 IgG 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)是将特异性梅毒螺旋体抗原包被在明胶颗粒上,与血清中特异性抗体结合后 出现肉眼可见的凝集反应的检测方法。 2.结果:采用ELISA试验和TRUST 试验同时进行检测, 阳性结果均用 TPPA 试验进行确定,下表是两种方法检验结 果的比较。 45例标本,经TPPA 试验以及临床初诊为44 例,TRUST 法结果为15 例阳性,30 例为阴性;ELISA 法结果为20 性,25例为阴性。30 例TRUST 阴性标本中有5 例为假阴性; 15 例TRUST 阳性标本中有5 例为假阳性。以 TPPA 检测结 果为标准,25 例ELISA 阴性标本其TPPA 法结果仍为阴性。 20 例ELISA 阳性标本其 TPPA 检测结果为19 阳性。45例标本,TRUST 法假阳性5 例,假阴性5 例。TRUST 法敏感性和特异性分别为75%和85.7%,ELISA 法敏感性和 特异性分别为100%和96.1%。

ELISA 法与TPPA 法检测结果 之间无显著差异。 梅毒螺旋体(Treponemapallidum .TP)感染俗称梅毒,是 一种慢性传染病,主要通过性接触和血液传播主,是我国三 大性传播疾病之一。近年来,梅毒的发病率逐年上升,面在 术前,输血后,妊娠等的梅毒的检测也已作为常规检测项目。 由于梅毒的临床表现复杂,易被漏诊或误诊,因此梅毒实验室检查结果对病情的判断显得极为重要。现在梅毒筛查的 方法主要有:RPR,TRUST,ELISA,TPPA 异性,灵敏度各异。TPPA是目前公认的最佳梅毒确认实验 方法,但由于成本高rpr,操作时间长等原因不适于临床筛查, 因此,选择一种特异性强,灵敏度高的方法显得尤为重要。 人体感染梅毒螺旋体6—10 周后,血清中会产生两类抗 体,一类是直接针对梅毒螺旋体的特异性抗体,另一类则是 针对类脂质的非特异性抗体。针对类脂质的抗体因有直接针 对梅毒螺旋体,因此无特异 性。除感染梅毒外,患其它一些疾病以及生理状况的改变,体内也可能产生低滴度的抗类脂质抗体。诊断梅毒时,所做 的梅毒血清学检查即检测这两类抗体。TRUST 是一种非特异 性实验,在一期梅毒早期和晚期潜伏梅毒可呈阴性,在一期 潜伏梅毒及晚期梅毒中检出率为58%—85%,其敏感性我科 检测为 75%,较 ELISA 法测得梅毒敏感性低。

ELISA 利用基因重组工程合成,其检测的是梅毒IgG和IgM的混合 抗体,ELISA 法具有试剂价廉,保存时间久且稳定等优点, 操作简便,取样量少,不受样品中纤维蛋白和溶血的影响, 一次可进行多份样本的检测,结果用酶标仪分析,客观准确, 结果便于保留,可用作筛查和确认试验。因此,因ELISA 的准确性及方法学的优势,可作为梅毒血清学诊断实验的首选方法。 综上所述,TRUST法操作简便,可重复性好,利用检测 滴度来观察疗效,复发再感染效果好,适用于标本的初检, 但其特异性和敏感性较ELISA 法低。ELISA 法检测梅毒灵敏 度,特异性均明显高于 TRUST 法,其结果也与 TPPA 显著差异,可用于大规模的标本筛查和临床梅毒的筛查,诊断,是检测梅毒的首选方法。虽然 TPPA 法是公认的梅毒确 认方法,但是其价格昂贵,所以ELISA 法基本可替代TPPA 由于近年来梅毒发病率较高,上报传染病例数明显增加rpr,而其中出现的梅毒假阳性也呈逐渐上升趋势,所以为了更 好,更准确地检测,实验室应采取特异性和非特异性两种梅 毒血清检测方法同时进行,二者结合可以更有效地减少漏诊 和误诊,便于临床指导用药。 医学时代,2006 陈春梅,曾志良,潜伏梅毒85例血清学检测分析研究


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